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FAQ-Novus

Novus사의 항체는 in vivo 실험에 사용이 가능한가요?

Novus사의 항체는 오직 in vitro실험에서만 사용 가능하며, in vivo 실험에는 사용을 권장하지 않습니다. 

Novus사 항체는 어떻게 분주해야 하나요?

반복적인 냉동과 해동을 피하기 위해 항체는 냉동 보관 전에 분주하기를 권장하며 BSA 1:2-1:20를 함유한 용액에 희석하여 사용합니다. 또한, 항체를 희석하기 전에 단백질 내 미생물의 생육을 늦추기 위해 여과하여 사용하기를 권장합니다.   


IgG의 분자량은 얼마입니까?

IgG protein는 2개의 heavy chain과 2개의 light chain으로 구성 되어 있습니다. heavy chain의 분자량은 약 55 kDa이고, light chain는 약25 kDa 이므로 총 분자량은 약160 kDa 입니다. 


Western blot 실험시 실제 band size가 예상했던 size와 다른 이유는 무엇인가요?

일반적으로 단백질은 PAGE gel matrix 통해 이동하면서 각각의 분자량에 따라 분리됩니다. 분자량이 작은 단백질은 gel을 통과할 때 더 빨리 이동하지만, 전사 후 변형 (post-translational modification), 번역 후 절단 (post-translational cleavage, splice variation), 전자 변형 (charge variation) 등 많은 factor에 의해 영향을 받기 때문에 실제 band size와 예상된 size가 달라질 수 있습니다.


Western blot 실험 시 1차 항체를 사용할 때 어떤 blocking buffer의 사용을 권장합니까?

Novus사에서는 Western blot 실험 시 3 % BSA 또는 5 % NFDM (Non-fat Dry Milk)를 사용합니다. 그러나 Phosphoprotein과 관련된 실험을 할 경우에는 BSA (in TBST)로 blocking 합니다. 반면, Milk는casein (phosphoprotein) 을 포함하고 있어 검출시 높은 background 원인이 됩니다.


Nouvs사 에서는 test를 위한 free sample 제공이 가능한가요?

Novus사는 free sample을 제공하지 않습니다. 하지만 몇몇의 상품은 저렴한 가격으로 sample size를 제공 받을 수 있습니다.

 

Novus사 항체는 어떻게 저장하나요?

Novus는 표기된 datasheet 에 기재된 방식대로 저장해야 합니다. 부적절한 저장은 항체의 활성을 떨어뜨리며, 이 경우 결과에 대한 책임을 지지 않습니다. 항체는 반복적인 냉동/해동보다 4 °C 보관을 권장합니다.


Novus사의 1차 항체는 재사용이 가능한가요?

Novus사는 항체에 대한 재사용을 권장하지 않습니다. 

항체 보관 시 보존액을 사용하는 목적은 무엇인가요? 보존액은 항체의 특이성에 어떤 영향을 주나요?

보존액은 안정한 상태로 사용기한을 늘리기 위해 사용하지만 이와 상관없이Novus사의 모든 항체는 받은 날짜로부터 6개월 동안 품질이 보장됩니다. 보존액에 사용되는 Sodium azide는 박테리아 성장을 억제할 뿐 항체의 특이성 (specificity)에는 영향을 끼치지 않습니다.

 

Novus사 제품들의 농도는 얼마인가요?

Novus사 제품의 농도는 제품과 함께 받으신 상품 안의 datasheet에 기재되어 있습니다. 또한 온라인 상의 datasheet에서도 확인할 수 있습니다.


Novus사에서 실험해보지 않은 종에 대해 실험할 수 있나요?

종들의 교차반응성 (cross-reactivity)는 datasheet에서 확인할 수 있습니다. 하지만 실험되지 않은 종에서 항체를 사용하기 원한다면 protein과 immunogen사이의 sequence alignment를 확인해야 합니다. sequence alignment는 Swiss-Prot 또는 ClustalW에서 온라인 database에서 검색하면 됩니다. Alignment score가 85%이면 좋은 조건이며 종들간에 교차반응할 수 있다. Novus사는 datasheet에 표기된 종들에 대해서 항체를 실험 하기를 권장합니다.


Novus사는Western plot 실험에 대한 HIF-1 alpha 정보를 가지고 있나요?

HIF protein 는 degrading protein으로서 cellular re-oxygenation 일어나자마자 1 분 이내에 완전히 degradation 됩니다. 그러므로 실험에 있어서 시간이 가장 중요하며, ice cold buffer에서 cell 를 다루어야 하고, ice에서 protein prep을 진행해야 합니다. 안정화된 HIF-1은 핵으로 translocation 되므로 nuclear extract에서 최상의 결과를 얻을 수 있습니다. 반면total cell extract에서 HIF-1 확인은 가능하지만 지저분 할 뿐만 아니라 염색이 약하게 나타날 수 있습니다. Unprocessed HIF-1는 ~95 kDa 이지만 전체 post-translationally modified form은 ~116 kDa입니다.


실험 시 positive control은 어떠한 기준으로 선택하나요?

Novus사는 적당한 control에서 실험 가능한 antibody를 사용하기를 권장합니다. 상품의 datasheet에 positive control tissues, cell lines, extract가 표기 되어 있습니다. 그러나 표기 되어 있지 않다면, Swiss-Prot, NCBI, GeneCards, ATCC에서 알려진 positive control을 확인해야 합니다.


Novus사 1차 항체에 대한 적절한 2차 항체는 어떻게 선택하나요?

2차 항체는 사용한 1차 항체의 host 종에 따라 선택할 수 있습니다. (예를들어, 1차항체가 chicken polyclonal IgG 라면, 2차 항체는 anti- chicken secondary antibody를 사용합니다.)


Immunohistochemistry 실험시 HIF-1 alpha를 확인하기 위한 최적의 positive control은 무엇인가?

Glioblastoma multiforme는 immunohistochemistry 실험을 위한 최적의 positive control입니다. 

Overexperssion lysate는 무엇입니까?

Overexperssion lysate는 높은 농도의 단백질을 포함한 lysate로서 western blot실험시 positive control로 사용합니다. 

서로 다른 항체를 재조합 단백질이나 lysate에 사용할 때 왜 서로 다른 MW 결과가 나오나요?

여러가지 다른 이유로 재조합 단백질과 lysate에서 size가 다른 것을 볼 수 있습니다. 경우에 따라서는 lysate나 protein이 full-length가 아니기 때문에 post-translational modification의해 차이를 보일 수 있고, 경우에 따라서는 마커가 tagged된 protein이 band크기에 영향을 미치는 경우가 있습니다.