Preperation

 1. section하기전에 2주이상 보관하시려면 -70℃ 에서 block 보관

2. 4~10um 으로 박절하여 coating slide 부착한 slide 는- 70℃ 에 보관해야 한다.

3. 실험하기전에 slide 는 실온에서 warming

4. cold acetone에 10min 고정한 후에 PBS 2~3단계 washing

IHC

Detection KIT

Spilink kit 

#D01-110

1. 3% Hydrogen peroxidase (#TA-125-HP, LAB VISION) 5분 (R.T) 

    or 0.1 ~1% Hydrogen peroxidase 5~10 분 (R.T)

2. TBS or PBS washing 3min x 2

3. Blocking solution ( 10% normal serum ) 10분 

   *washing 하지 않고 깨끗하게 제거만 한다 

4. Primary Ab 30분 ~ 1시간 (R.T) or 4℃에서 over night  

   * 적정한 농도로 antibody diluent 를 이용해서 희석해서 사용한다

5. TBS or PBS washing 3min x 2

6. Biotin labeled 2nd Ab  10분 ( R.T)

7. TBS or PBS washing 3min x 2

8. streptavidin-HRP 10분 (R.T)

9. DW washing 5min x2

10. chromogen ( DAB 는 3~5분, AEC 는 5~10분 현미경 보면서 )

11. DW washing

12 . Mayer's Hematoxylin (#HMM500, scytek)  1분~ 3분

13. DW - buffer - DW 로 washing

14. (option) bluing buffer (#BRT500, scytek) 1~3 분

15. DAB 로 발색한경우, 저농도->고농도 alcohol 단계를 거쳐 xylene 한후에 

    permernant mount (#01120, sugipath사)

   AEC 로 발색한 경우, washing 한 후에 수용성 mount 로 봉입 (AMT060, scytek or E03-100, GBI)

** kit 에 따라 detection method 는 약간씩 다릅니다.