• HOME
  • 학술정보
  • Protocol

Protocol

EBV ISH (zytovision)

Hybridization ZytoFast EBV - ISH Protocol (Zytovision) 

 Preparation

 √ Washing buffer 준비 (X20) 5개 준비 ( 1개는 55℃ prewarming, 나머지는 실온)

 √ probe solution 은 사용전에 55℃ prewarming ( 사용전 shake or vortex )

 √ detection 과 wash regent 는 사용전 RT 에서 warming ( 사용전 shake or vortex )

 √ slide 는 Dewax ( 70℃ 10분동안 slide warming -> 100% xylen 10분 x2 ->100 ethanol5분x1)

 √ Slide 를 air dry 시킨다.

 Pretreatment

 1. Pepsin solution 4-5 방울을 slide 조직위에 떨어뜨린후 37℃ 에서 30분 incubation 한다

 2. Stopping pepsin treatment : 100% enthanol 에 10 초동안 슬라이드를 담군다.

 3. DW 로 30초 Washing 한다.

 4. Slide 를 air dry 시킨다.

 Hybridization

 1.EBV probe 20ul 를 조직위에 떨어뜨려 coverslip (18x18) 으로 덮고 sealing한 후, 55℃ 에서 2     시간 incubation 한다.

 2. coverslip 을 제거한후, RT 에서 wash buffer 에 5분동안 담군다.

 3. 55℃ 에 warming한 washing buffer 에 5분동안 washing 하고, RT 에서 5분동안 washing 한       다.

 4. DW 로 2-3 초간 Washing 한다.

 5. Slide 를 air dry 시킨다.

 Detection 

 1. AP-anti-Biotin 4-5 방울을 조직위에 떨어뜨린후, 34℃ -37℃ humidity chamber 에서

   30분 incubation 한다

 2. wash buffer 로 2분동안 washing 을 2번 한다.

 3. DW 로 2분 Washing 한다.

 4. Slide 를 air dry 시킨다.

 5. AP substrate 4-5 방울을 조직위에 떨어뜨린후 34℃ -37℃ humidity chamber 에서 

   40~60분 incubation 한다

 6. DW 로 2분동안 washing 을 3번 반복한다. 

  1. coplin jar 5개 ~8개 

  2. Mounting  ( 수용성 봉입제 사용 ) 

  3. fixogum

  option : counter staining ( green or red) 

  장비 : water bath (55도), Hybridizer 

    관리자 DATE   2016-12-14 13:43:41